| Реферат |
Изобретение относится к области молекулярной биологии и может быть использовано в сельском хозяйстве, в частности, в лабораторной диагностике для выявления бактерии – возбудителя розового бактериоза зерна пшеницы и ржи Erwinia rhapontici (Millard 1924) Burkholder 1948 (далее – E. rhapontici) в пробах и (или) образцах продукции растительного происхождения, а также для решения научно-исследовательских задач по изучению данного микроорганизма.Способ выявления бактерии вида Erwinia rhapontici методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с 100% аналитической специфичностью в бактериальных культурах и в экстрактах вегетативных частей гиппеаструма (Hippeastrum sp.), герберы (Gerbera L.), в экстракте семян щирицы зеленой (Amaranthus viridis L.) в концентрации 9,32*101 КОЕ/мл и выше, в экстрактах луковиц и вегетативных частей цикламена персидского (Cyclamen persicum var. giganteum W.Bull), вегетативных частей мелиссы лекарственной (Melissa officinalis L.), мяты перечной (Mentha x piperita L.), ромашки обыкновенной (Matricaria chamomilla L.), гороха сахарного (Pisum sativum L. var. macrocarpon), чечевицы столовой (Lens culinaris Medik.), мангольда алого (Beta vulgaris ssp. cicla (L.) Schubeler & M. Martens), агавы прямой (Agave striata Zucc.), агавы литтея (Agave subgen. Littaea (Tagl.) Baker), агавы мелкоцветковой (Agave parviflora Torr.), щирицы зеленой (Amaranthus viridis L.), спатифиллюма (Spathiphyllum Schott), гвоздики (Dianthus L.), актинидии китайской (Actinidia chinensis Planch.), томата (Lycopersicon lycopersicum L.), шиповника морщинистого (Rosa rugosa Thunb.), голубики (Vaccinium corymbosum L.), репы огородной (Brassica rapa L.), зубчиков лука-чеснока (Allium sativum L), плодов мушмулы германской (Mespilus germanica L.), корнеплодов моркови обыкновенной (Daucus carota L.), семян пупавника благородного (Chamaemelum nobile (L.) All.), пшеницы твердой (Triticum durum Desf.), тритикале (×Triticosecale Wittm. ex A.Camus), семян и вегетативных частей фасоли обыкновенной (Phaseolus vulgaris L.), семян и вегетативных частей люцерны посевной (Medicago sativa L.), семян и вегетативных частей пшеницы мягкой (Triticum aestivum L.), семян и вегетативных частей рапса (Brassica napus L.) в концентрации 9,32*102 КОЕ/мл и выше, в экстракте семян ячменя обыкновенного (Hordeum vulgare L.) в концентрации 9,32*103 КОЕ/мл и выше, включающий два праймера ABCconv-F/ABCconv-R, при этом прямой праймер ABCconv-F 5`-GCAGCCTTTTCAACTCGGCA-3`имеет длину 20 п.о. и GC-составом 55%, обратный праймер ABCconv-R 5`-CGTTGGTTAATCCACTGACGA-3` имеет длину 21 п.о. и GC-составом 48%, условия ПЦР, а именно программа амплификации при выявлении E. rhapontici в экстрактах растений-хозяев включает один цикл 95°C – 5 мин, далее – 40 циклов, включающие этапы 95°C – 15 с, 65°C – 30 с, 72°C – 45 с, затем один цикл 72°C – 7 мин, а условия ПЦР, а именно программа амплификации при выявлении E. rhapontici в бактериальных культурах включает один цикл 95°C – 5 мин, далее – 25 циклов, включающие этапы 95°C – 15 с, 65°C – 30 с, 72°C – 45 с, затем один цикл 72°C – 7 мин и состав реакционной смеси при выявлении E. rhapontici в экстрактах растений-хозяев и бактериальных культурах оценивается из расчета на одну пробу общим объемом 25 мкл, в частности, готовая смесь для ПЦР, 10 пикомоль каждого праймера, 2 мкл ДНК-матрицы.
Изобретение позволяет оперативно и со 100% специфичностью выявлять E. rhapontici в бактериальных культурах и в экстрактах вегетативных частей гиппеаструма (Hippeastrum sp.), герберы (Gerbera L.), в экстракте семян щирицы зеленой (Amaranthus viridis L.) в концентрации 9,32*101 КОЕ/мл и выше, в экстрактах луковиц и вегетативных частей цикламена персидского (Cyclamen persicum var. giganteum W.Bull), вегетативных частей мелиссы лекарственной (Melissa officinalis L.), мяты перечной (Mentha x piperita L.), ромашки обыкновенной (Matricaria chamomilla L.), гороха сахарного (Pisum sativum L. var. macrocarpon), чечевицы столовой (Lens culinaris Medik.), мангольда алого (Beta vulgaris ssp. cicla (L.) Schubeler & M. Martens), агавы прямой (Agave striata Zucc.), агавы литтея (Agave subgen. Littaea (Tagl.) Baker), агавы мелкоцветковой (Agave parviflora Torr.), щирицы зеленой (Amaranthus viridis L.), спатифиллюма (Spathiphyllum Schott), гвоздики (Dianthus L.), актинидии китайской (Actinidia chinensis Planch.), томата (Lycopersicon lycopersicum L.), шиповника морщинистого (Rosa rugosa Thunb.), голубики (Vaccinium corymbosum L.), репы огородной (Brassica rapa L.), зубчиков лука-чеснока (Allium sativum L), плодов мушмулы германской (Mespilus germanica L.), корнеплодов моркови обыкновенной (Daucus carota L.), семян пупавника благородного (Chamaemelum nobile (L.) All.), пшеницы твердой (Triticum durum Desf.), тритикале (×Triticosecale Wittm. ex A.Camus), семян и вегетативных частей фасоли обыкновенной (Phaseolus vulgaris L.), семян и вегетативных частей люцерны посевной (Medicago sativa L.), семян и вегетативных частей пшеницы мягкой (Triticum aestivum L.), семян и вегетативных частей рапса (Brassica napus L.) в концентрации 9,32*102 КОЕ/мл и выше, в экстракте семян ячменя обыкновенного (Hordeum vulgare L.) в концентрации 9,32*103 КОЕ/мл и выше. Изобретение может быть использовано как метод выявления E. rhapontici в рутинной лабораторной диагностике. 1 н.п. ф-лы, 6 табл., 42 ил.
|
| Возможные направления использования |
Изобретение позволяет оперативно и со 100% специфичностью выявлять E. rhapontici в бактериальных культурах и в экстрактах вегетативных частей гиппеаструма (Hippeastrum sp.), герберы (Gerbera L.), в экстракте семян щирицы зеленой (Amaranthus viridis L.) в концентрации 9,32*101 КОЕ/мл и выше, в экстрактах луковиц и вегетативных частей цикламена персидского (Cyclamen persicum var. giganteum W.Bull), вегетативных частей мелиссы лекарственной (Melissa officinalis L.), мяты перечной (Mentha x piperita L.), ромашки обыкновенной (Matricaria chamomilla L.), гороха сахарного (Pisum sativum L. var. macrocarpon), чечевицы столовой (Lens culinaris Medik.), мангольда алого (Beta vulgaris ssp. cicla (L.) Schubeler & M. Martens), агавы прямой (Agave striata Zucc.), агавы литтея (Agave subgen. Littaea (Tagl.) Baker), агавы мелкоцветковой (Agave parviflora Torr.), щирицы зеленой (Amaranthus viridis L.), спатифиллюма (Spathiphyllum Schott), гвоздики (Dianthus L.), актинидии китайской (Actinidia chinensis Planch.), томата (Lycopersicon lycopersicum L.), шиповника морщинистого (Rosa rugosa Thunb.), голубики (Vaccinium corymbosum L.), репы огородной (Brassica rapa L.), зубчиков лука-чеснока (Allium sativum L), плодов мушмулы германской (Mespilus germanica L.), корнеплодов моркови обыкновенной (Daucus carota L.), семян пупавника благородного (Chamaemelum nobile (L.) All.), пшеницы твердой (Triticum durum Desf.), тритикале (×Triticosecale Wittm. ex A.Camus), семян и вегетативных частей фасоли обыкновенной (Phaseolus vulgaris L.), семян и вегетативных частей люцерны посевной (Medicago sativa L.), семян и вегетативных частей пшеницы мягкой (Triticum aestivum L.), семян и вегетативных частей рапса (Brassica napus L.) в концентрации 9,32*102 КОЕ/мл и выше, в экстракте семян ячменя обыкновенного (Hordeum vulgare L.) в концентрации 9,32*103 КОЕ/мл и выше. Изобретение может быть использовано как метод выявления E. rhapontici в рутинной лабораторной диагностике.
|
