| Реферат |
Изобретение относится к области молекулярной биологии и может быть использовано в сельском хозяйстве, в частности, в лабораторной диагностике для выявления бактерии – возбудителя розового бактериоза зерна пшеницы и ржи Erwinia rhapontici (Millard 1924) Burkholder 1948 (далее – E. rhapontici) в пробах и (или) образцах продукции растительного происхождения, а также для решения научно-исследовательских задач по изучению данного микроорганизма.
Способ выявления бактерии вида Erwinia rhapontici методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени» (ПЦР-РВ) в бактериальных культурах и экстрактах семян и растений щирицы зеленой (Amaranthus viridis L.), растений спатифиллюма (Spathiphyllum Schott), растений моркови обыкновенной (Daucus carota L.), растений персика (Prunus persica (L.) Batsch), семян томата (Lycopersicon lycopersicum L.), зубчиков лука-чеснока (Allium sativum L), семян ячменя обыкновенного (Hordeum vulgare L.), семян ржи посевной (Secale cereale L.), растений щирицы гибридной (Amarantus hybridus L.) в концентрации 9,32*101 КОЕ/мл и выше, в экстрактах растений и семян пшеницы мягкой (Triticum aestivum L.), растений райграса однолетнего (Lolium multiflorum Lam.), растений и семян фасоли обыкновенной (Phaseolus vulgaris L.), растений гороха сахарного (Pisum sativum L. var. macrocarpon), семян гороха посевного (Pisum sativum L.), семян нута бараньего (Cicer arietinum L.), растений и семян чечевицы столовой (Lens culinaris Medik.), растений рапса (Brassica napus L.), растений и семян пшеницы твердой (Triticum durum Desf.), растений гиппеаструма (Hippeastrum Herb.), растений гвоздики (Dianthus L.), растений герберы (Gerbera L.), растений актинидии китайской (Actinidia chinensis Planch.), растений мелиссы лекарственной (Melissa officinalis L.), растений пупавника благородного (Chamaemelum nobile (L.) All.), растений ревеня (Rheum rhaponticum L.), растений свеклы обыкновенной (Beta vulgaris L.), растений томата (Lycopersicon lycopersicum L.), растений и луковиц цикламена персидского (Cyclamen persicum var. giganteum W.Bull), растений лука-чеснока (Allium sativum L), листьев шелковицы (Morus L.), растений клевера (Trifolium Tourn. ex L.), растений цимбидиума Фабера (Cymbidium faberi Rolfe.), вегетативных частей яблони (Malus P. Mill.), листьев айвы продолговатой (Cydonia oblonga Mill.), растений агавы прямой (Agave striata Zucc.), растений агавы американской (Agave americana L.), растений агавы мелкоцветковой (Agave parviflora Torr.), растений агавы литтея (Agave subgen. Littaea (Tagl.) Baker), растений и семян тритикале (×Triticosecale Wittm. ex A.Camus), растений репы огородной (Brassica rapa L.), растений рябины обыкновенной (Sorbus aucuparia L.), растений мангольда алого (Beta vulgaris ssp. cicla (L.) Schubeler & M. Martens) в концентрации 9,32*102 КОЕ/мл и выше, в экстрактах семян рапса (Brassica napus L.), растений и семян люцерны посевной (Medicago sativa L.), луковиц гиацинта восточного (Hyacinthus orientalis L.), растений мяты перечной (Mentha x piperita L.), растений ромашки (Matricaria L.), корнеплодов моркови обыкновенной (Daucus carota L.), семян свеклы обыкновенной (Beta vulgaris L.), плодов мушмулы германской (Mespilus germanica L.), растений голубики (Vaccinium corymbosum L.) и растений шиповника морщинистого (Rosa rugosa Thunb.) в концентрации 9,32*103 КОЕ/мл и выше, включающий два праймера DoxX-F/DoxX-R и зонд DoxX-P, при этом прямой праймер DoxX-F 5`-CGCTTACCCGCTTTAACCAG-3` имеет длину 20 п.о., GC-составом 55% и Tm=60°C, обратный праймер DoxX-R 5`-CGCCAATGCCGGAATGCA-3`имеет длину 18 п.о., GC-составом 61% и Tm=60°C, зонд DoxX-P 5`-6FAM-GCTGTTCCACGGCTGGCATAAG-BHQ1-3` имеет длину 22 п.о., GC-составом 59% и Tm=66°C, условия ПЦР-РВ, а именно программа амплификации включает один цикл 95°C – 5 мин., далее – 45 циклов, включающие этапы 95°C – 15 сек., 60°C – 40 сек. и состав реакционной смеси оценивается из расчета на одну пробу общим объемом 25 мкл, в частности, 10 пикомоль каждого праймера, 5 пикомоль зонда, 2 мкл ДНК-матрицы.
Изобретение позволяет оперативно выявлять E. rhapontici среди бактериальных культур и в экстрактах семян и растений щирицы зеленой (Amaranthus viridis L.), растений спатифиллюма (Spathiphyllum Schott), растений моркови обыкновенной (Daucus carota L.), растений персика (Prunus persica (L.) Batsch), семян томата (Lycopersicon lycopersicum L.), зубчиков лука-чеснока (Allium sativum L), семян ячменя обыкновенного (Hordeum vulgare L.), семян ржи посевной (Secale cereale L.), растений щирицы гибридной (Amarantus hybridus L.) в концентрации 9,32*101 КОЕ/мл и выше, в экстрактах растений и семян пшеницы мягкой (Triticum aestivum L.), растений райграса однолетнего (Lolium multiflorum Lam.), растений и семян фасоли обыкновенной (Phaseolus vulgaris L.), растений гороха сахарного (Pisum sativum L. var. macrocarpon), семян гороха посевного (Pisum sativum L.), семян нута бараньего (Cicer arietinum L.), растений и семян чечевицы столовой (Lens culinaris Medik.), растений рапса (Brassica napus L.), растений и семян пшеницы твердой (Triticum durum Desf.), растений гиппеаструма (Hippeastrum Herb.), растений гвоздики (Dianthus L.), растений герберы (Gerbera L.), растений актинидии китайской (Actinidia chinensis Planch.), растений мелиссы лекарственной (Melissa officinalis L.), растений пупавника благородного (Chamaemelum nobile (L.) All.), растений ревеня (Rheum rhaponticum L.), растений свеклы обыкновенной (Beta vulgaris L.), растений томата (Lycopersicon lycopersicum L.), растений и луковиц цикламена персидского (Cyclamen persicum var. giganteum W.Bull), растений лука-чеснока (Allium sativum L), листьев шелковицы (Morus L.), растений клевера (Trifolium Tourn. ex L.), растений цимбидиума Фабера (Cymbidium faberi Rolfe.), вегетативных частей яблони (Malus P. Mill.), листьев айвы продолговатой (Cydonia oblonga Mill.), растений агавы прямой (Agave striata Zucc.), растений агавы американской (Agave americana L.), растений агавы мелкоцветковой (Agave parviflora Torr.), растений агавы литтея (Agave subgen. Littaea (Tagl.) Baker), растений и семян тритикале (×Triticosecale Wittm. ex A.Camus), растений репы огородной (Brassica rapa L.), растений рябины обыкновенной (Sorbus aucuparia L.), растений мангольда алого (Beta vulgaris ssp. cicla (L.) Schubeler & M. Martens) в концентрации 9,32*102 КОЕ/мл и выше, в экстрактах семян рапса (Brassica napus L.), растений и семян люцерны посевной (Medicago sativa L.), луковиц гиацинта восточного (Hyacinthus orientalis L.), растений мяты перечной (Mentha x piperita L.), растений ромашки (Matricaria L.), корнеплодов моркови обыкновенной (Daucus carota L.), семян свеклы обыкновенной (Beta vulgaris L.), плодов мушмулы германской (Mespilus germanica L.), растений голубики (Vaccinium corymbosum L.) и растений шиповника морщинистого (Rosa rugosa Thunb.) в концентрации 9,32*103 КОЕ/мл и выше.
Изобретение может быть использовано как метод выявления E. rhapontici в рутинной лабораторной диагностике. 1 н.п. ф-лы, 6 табл., 65 ил.
|
| Возможные направления использования |
Изобретение позволяет оперативно выявлять E. rhapontici среди бактериальных культур и в экстрактах семян и растений щирицы зеленой (Amaranthus viridis L.), растений спатифиллюма (Spathiphyllum Schott), растений моркови обыкновенной (Daucus carota L.), растений персика (Prunus persica (L.) Batsch), семян томата (Lycopersicon lycopersicum L.), зубчиков лука-чеснока (Allium sativum L), семян ячменя обыкновенного (Hordeum vulgare L.), семян ржи посевной (Secale cereale L.), растений щирицы гибридной (Amarantus hybridus L.) в концентрации 9,32*101 КОЕ/мл и выше, в экстрактах растений и семян пшеницы мягкой (Triticum aestivum L.), растений райграса однолетнего (Lolium multiflorum Lam.), растений и семян фасоли обыкновенной (Phaseolus vulgaris L.), растений гороха сахарного (Pisum sativum L. var. macrocarpon), семян гороха посевного (Pisum sativum L.), семян нута бараньего (Cicer arietinum L.), растений и семян чечевицы столовой (Lens culinaris Medik.), растений рапса (Brassica napus L.), растений и семян пшеницы твердой (Triticum durum Desf.), растений гиппеаструма (Hippeastrum Herb.), растений гвоздики (Dianthus L.), растений герберы (Gerbera L.), растений актинидии китайской (Actinidia chinensis Planch.), растений мелиссы лекарственной (Melissa officinalis L.), растений пупавника благородного (Chamaemelum nobile (L.) All.), растений ревеня (Rheum rhaponticum L.), растений свеклы обыкновенной (Beta vulgaris L.), растений томата (Lycopersicon lycopersicum L.), растений и луковиц цикламена персидского (Cyclamen persicum var. giganteum W.Bull), растений лука-чеснока (Allium sativum L), листьев шелковицы (Morus L.), растений клевера (Trifolium Tourn. ex L.), растений цимбидиума Фабера (Cymbidium faberi Rolfe.), вегетативных частей яблони (Malus P. Mill.), листьев айвы продолговатой (Cydonia oblonga Mill.), растений агавы прямой (Agave striata Zucc.), растений агавы американской (Agave americana L.), растений агавы мелкоцветковой (Agave parviflora Torr.), растений агавы литтея (Agave subgen. Littaea (Tagl.) Baker), растений и семян тритикале (×Triticosecale Wittm. ex A.Camus), растений репы огородной (Brassica rapa L.), растений рябины обыкновенной (Sorbus aucuparia L.), растений мангольда алого (Beta vulgaris ssp. cicla (L.) Schubeler & M. Martens) в концентрации 9,32*102 КОЕ/мл и выше, в экстрактах семян рапса (Brassica napus L.), растений и семян люцерны посевной (Medicago sativa L.), луковиц гиацинта восточного (Hyacinthus orientalis L.), растений мяты перечной (Mentha x piperita L.), растений ромашки (Matricaria L.), корнеплодов моркови обыкновенной (Daucus carota L.), семян свеклы обыкновенной (Beta vulgaris L.), плодов мушмулы германской (Mespilus germanica L.), растений голубики (Vaccinium corymbosum L.) и растений шиповника морщинистого (Rosa rugosa Thunb.) в концентрации 9,32*103 КОЕ/мл и выше. Изобретение может быть использовано как метод выявления E. rhapontici в рутинной лабораторной диагностике.
|
