Вирусы гепатитов В и дельта: поиск факторов пермиссивности клеток и анализ изменений в инфицированных клетках

Название НИОКТР	Вирусы гепатитов В и дельта: поиск факторов пермиссивности клеток и анализ изменений в инфицированных клетках
Аннотация	Вирусы гепатитом В и дельта (HBV, HDV) представляют собой гемоконтактные инфекции человека, вызывающие опасные заболевания печени, включая цирроз и гепатоцеллюлярную карциному. По современным оценкам в мире насчитывается около 254 млн хронических носителей HBV, из которых примерно 5% инфицировано и HDV. По данным 2022 г в мире от последствий гепатита В ежегодно погибается около 1.1 млн человек. Несмотря на наличие эффективной профилактической вакцины количество инфицированных в мире снижается крайне слабо. Поэтому крайне актуальными остаются исследования молекулярной биологии данных вирусов, механизмов их патогенеза и создания подходов как лечению самих инфекций, так и ассоциированных патологий печени. Основным препятствием в таких исследованиях остается несовершенство лабораторных моделей. Первая инфекционная клеточная модель была создана через 30 лет после открытия патогена: была открыта клеточная линия прогениторных клеток печени HepaRG, которая, как оказалось, экспрессирует необходимый для проникновения обоих вирусов NTCP рецептор. Хотя эта линия может дифференцироваться в смесь гепатоцит-и холангиоцит-подобных клеток, лишь малая часть гепатоцитов инфицируется вирусами (до 10-15% в случае HBV и 3-6% в случае HDV). С тех пор были получены варианты различных линий, гиперэкспрессирующих данный рецептор, однако это не привело к существенному повышению пермиссивности клеток. Культура клеток HepaRG крайне высоко гетерогенна: присутствуют гепатоциты и холангиоциты, причем с различной степенью дифференцировки. Соответственно, крайне актуальным остается поиск других факторов пермиссивности для преодоления этого недостатка существующих систем, что представляет собой первую цель проекта. Другим недостатком существующих моделей, являющийся следствием низкой пермиссивности, является невозможность изучать нарушения вирусами процессов непосредственно в инфицированных клетках из-за присутствия значительного количества неинфицированных клеток в анализируемом образце. Поэтому все группы в области либо работают с заведомо устаревшими моделями (гиперэкспрессия индивидуальных белков), либо с описанными выше инфекционными, в случае которых большинство явлений, описанных для «старых» систем, не оспроизводится. Для устранения противоречий между различными системами, выявления путей, на которые воздействуют вирусы непосредственно в инфицированных клетках, а также для поиска потенциальных факторов пермиссивности мы предлагаем применить два подхода. Первый состоит в выделении популяций инфицированных HВV и/или HDV клеток. К сожалению, часто применяемый в случае других вирусов подход по встраиванию в геном патогена репортерного гена для этих вирусов почти полностью блокирует их репликацию из-за небольшого размера их геномов (3.2 kb для HBV, <1700 нукл. для HDV). Поэтому нами будут получены линии клеток, экспрессирующие ген репортерного белка под контролем промотора активируемого соответствующим вирусом гена. Отделение популяций инфицированных и неинфицированных клеток может быть выполнено проточной цитометрией для дальнейшего анализа дифференциальной экспрессии генов. Второй подход заключается в анализе транскриптомов единичных клеток. Сравнение транскриптомов гепатоцит-подобных клеток, несущих и не несущих вирусные РНК, позволит выявить дифференциально- экспрессирующиеся гены, скорее всего включающие факторы пермиссивности. Сопоставление списков генов из разных клеточных линий может позволить сузить спектр потенциальных факторов. Клонирование ряда таких генов и гиперэкспрессия в клетках HepaRG и/или HepG2 позволит установить их роль в восприимчивости к инфекции и в регуляции их репликации. Итогом этой части работы может стать создание более пермиссивных к HBV и HDV линий, крайне востребованных в области. Сопоставление профилей экспрессии генов инфицированных клеток и клеток из неинфицированных культур, а также результатов двух вышеперечисленных подходов дадут представление об изменениях, происходящих непосредственно в ответ на инфекцию.
Доступ к ОКОГУ исполнителя	False
Количество связанных РИД	0
Количество завершенных ИКРБС	0
Сумма бюджета	21000.0
Дата начала	2025-06-02
Дата окончания	2027-12-31
Номер контракта	25-14-00332
Дата контракта	2025-05-30
Количество отчетов	1
УДК	578.2"21
Количество просмотров	27
Руководитель работы	Иванов Александр Владимирович
Руководитель организации	Георгиева София Георгиевна
Исполнитель	Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта Российской академии наук
Заказчик	Российский научный фонд
Федеральная программа	—
Госпрограмма	—
Основание НИОКТР	Грант
Последний статус	2025-06-23 08:34:07 UTC, 2025-06-23 08:34:07 UTC
ОКПД	Услуги, связанные с научными исследованиями и экспериментальными разработками в области биологических наук
Отраслевой сегмент	—
Минздрав	—
Межгосударственная целевая программа	—
Ключевые слова	метаболизм,; пермиссивность; репликация вирусов,; вирус гепатита дельта,; вирус гепатита В,
Соисполнители	—
Типы НИОКТР	Фундаментальное исследование
Приоритетные направления	—
Критические технологии	—
Рубрикатор	34.15.31 - Молекулярная биология вирусов
OECD	—
OESR	Вирусология; Биохимия и молекулярная биология
Приоритеты научно-технического развития	в) переход к персонализированной, предиктивной и профилактической медицине, высокотехнологичному здравоохранению и технологиям здоровьесбережения, в том числе за счет рационального применения лекарственных препаратов (прежде всего антибактериальных) и использования генетических данных и технологий;
Регистрационные номера	—