| Аннотация |
Инвазионно-метастатический процесс переводит опухоль из разряда локальных патологий в системное заболевание, угрожающее жизни больного. Рак яичников является одним из самых тяжелых онкогинекологических заболеваний, более 75% случаев составляют серозные high grade карциномы, а его уникальной особенностью является трансперитонеальное метастазирование. Особое клиническое значение имеют пограничные интраэпителиальные опухоли, прогноз которых бывает благоприятным, однако, в других случаях наблюдается активация метастазирования, приводящего к смерти больных.
Программа эпителиально-мезенхимального перехода (ЭМП) является ключевой программой, инициирующей миграцию, инвазию и метастазирование раковых клеток. Большинство данных о миграции опухолевых клеток, получены на постоянных клеточных линиях, однако, в случае рака яичников далеко не все данные можно перенести в клинику, так как эти линии получены в результате селекции in
vitro и долгое время были плохо типированы. Уникальной особенностью Проекта является то, что исследования клеточных, цитоскелетных и молекулярных механизмов диссеминации опухолевых клеток будут перенесены на опухолевый материал, полученный при первичной операции больных раком яичников. Из 50 опухолевых образцов будут получены первичные культуры опухолевых клеток,
миграция и инвазия которых впервые будут изучены в системах, моделирующих последовательные этапы метастазирования клеток рака яичников в организме: миграцию клеток из опухоли, образование сфероидов в асците, трансперитонеальную инвазию мезотелия, миграцию в коллагеновом матриксе субмезотелиального пространства, в том числе с участием адипоцитов сальника.
Целью Проекта 2025 будет идентификация механизмов, вовлеченных в миграцию клеток рака яичников, установление функциональной взаимосвязи маркеров ЭМП и цитоскелетных регуляторов с возникновением миграционного фенотипа у опухолевых клеток, изучение роли виментиновых промежуточных филаментов (ВПФ) в диссеминации клеток рака яичников, разработка подхода для оценки
метастатического потенциала опухолей на основе анализа подвижности клеток первичных опухолевых культур. С использованием коррелятивной видеомикроскопии и иммунофлуоресцентной
микроскопии планируется впервые сопоставить миграционные характеристики клеток с организацией актинового цитоскелета, структурой системы промежуточных филаментов, экспрессией и распределением маркеров ЭМП, регуляторов актинового цитоскелета, белков межклеточной адгезии, фокальных адгезий, инвадоподий. Наши предварительные исследования показали существенные
различия в миграции клеток high grade и low grade серозных карцином, пограничных карцином. При выполнении проекта планируется получить экспериментальные доказательства нашей гипотезы о том, что метастазирующими клетками рака яичников являются слабо адгезивные, подвижные, пластичные клетки, которые можно наблюдать при видеомикроскопии первичных опухолевых культур. С использованием системы CRISPR/Cas9 из клеток линии рака яичников планируется получить клоны клеток с нарушением организации ВПФ (лишенные ВПФ и несущие мутацию Y117L, ингибирующую сборку филаментов) и исследовать миграцию и инвазию клеток в системах, моделирующих метастазирование рака яичников. Прижизненные исследования поведения клеток, полученных из опухолей яичников, идентификация молекулярных и цитоскелетных механизмов диссеминации клеток рака яичников, изучение регуляторной роли ВПФ на этапах метастазирования являются новыми и оригинальными.
С использованием программного обеспечения для распознавания и автоматического отслеживания мигрирующих клеток, определения параметров клеточной миграции и данных коррелятивной видеомикроскопии и иммунофлуоресцентной микроскопии впервые будет предложен подход для оценки метастатического потенциала опухолей на основе анализа подвижности клеток первичных опухолевых культур.
|
